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Preguntas técnicas frecuentes sobre inyección en la investigación y verificación de procesos (2)

2021-02-08

21: ¿Podría preguntar sobre el método de prueba para determinar el nivel de contaminación y la resistencia térmica (valor D) del microorganismo antes de la esterilización?

Respuesta: el nivel de contaminación microbiana suele interceptarse mediante filtración en membrana, para luego transferirse a la superficie de un medio sólido, donde se cultiva y cuenta. Es importante prestar atención al volumen de filtración y al número de microorganismos interceptados, asegurando así una tasa de detección suficiente (rendimiento de filtración adecuado) y la capacidad de contarlos (evitando que se intercepten demasiados microorganismos como para ser contabilizados).

 

22: ¿Cómo calcular la cantidad de inoculación según el valor D?

Respuesta: Cálculo de la cantidad de inoculación de esporas Ni = 10Do(lgNo + 6)/Di
Ni es el número de inoculación de esporas termotolerantes con indicador biológico; No es el límite de microorganismos contaminantes antes de la esterilización; Do es el valor D máximo permitido de los microorganismos contaminantes; Di es el valor D del indicador biológico de esporas termotolerantes.
 
23: Para los productos esterilizados finales mediante el método de probabilidad residual, si los microorganismos de cada lote están dentro del límite antes de la esterilización y el tiempo máximo permitido para la prueba es de 72 horas, pero el ciclo real de producción continua es significativamente más corto que 72 horas, ¿el resultado de la prueba constituye únicamente una referencia para determinar el nivel de garantía aséptica del producto esterilizado?
Respuesta: Es evidente que el resultado del análisis del contenido de microorganismos antes de la esterilización está muy por debajo de los requisitos del proceso de producción y no está destinado al control intermedio del lote actual de productos.
La importancia de la inspección: en primer lugar, evaluar el nivel de garantía aséptica de este lote de productos; en segundo lugar, tras acumular durante mucho tiempo datos sobre el contenido microbiano de múltiples lotes previos a la esterilización, se podrá realizar una evaluación integral del estado de contaminación microbiana en cada etapa del sistema de producción antes de la esterilización, con el fin de determinar si el sistema de producción puede controlar eficazmente la contaminación microbiana a un buen nivel y si es necesario implementar mejoras.
 
 
24: ¿Podría preguntar cuál es el método para estudiar la especie y la cantidad de microorganismos? ¿Cuáles son los equipos necesarios? Si se adopta el método de probabilidad residual, ¿es necesario determinar el nivel de microorganismos durante el proceso de producción, y cuánto aumentaría el costo si se implementara? Como fabricante de grandes infusiones, ¿debería establecerse un laboratorio microbiológico especializado para detectar el nivel de contaminación microbiana antes de la esterilización mediante el método de probabilidad residual?
Respuesta: El grado de contaminación microbiana, es decir, la cantidad, puede examinarse según el método de prueba de límite microbiano establecido en la Farmacopea; las especies microbianas pueden identificarse sucesivamente a partir de los siguientes aspectos:
1) Observe la morfología de la colonia a simple vista;
2) Morfología y movilidad microscópicas;
3) Prueba bioquímica general: tinción de Gram o prueba con KOH al 3 %;
4) Identificación bioquímica (es decir, prueba API) para identificar especies
Al utilizar el método de probabilidad residual, se debe detectar el nivel de contaminación microbiana del producto antes de la esterilización, incluyendo una prueba de ebullición con bacterias contaminantes (por ejemplo, 100 °C, 15 minutos) y el recuento microbiano.
El laboratorio microbiológico es esencial para los fabricantes de inyectables, y sus funciones básicas deben incluir la prueba del límite microbiano de materias primas y auxiliares, la prueba de contaminación microbiana antes de la esterilización, la prueba aséptica del producto, la prueba de endotoxinas bacterianas y la inspección dinámica del entorno de producción (contaje de partículas en el aire, bacterias flotantes y bacterias sedimentadas). Los laboratorios calificados también pueden realizar las siguientes tareas: identificación de microorganismos (se recomienda que el laboratorio central del grupo realice la identificación mediante API), calibración de indicadores biológicos (es decir, determinación del valor D; se sugiere que este trabajo lo lleve a cabo el laboratorio central del grupo empresarial).
 

25: ¿Es necesario verificar el proceso de esterilización para el método de sobreesterilización? ¿Cuál es la diferencia entre el proceso de investigación y desarrollo del producto y la verificación en la producción real del método de probabilidad residual?

Respuesta: por supuesto, se requiere verificación. Artículo 83 del Apéndice de EU CGMP: todos los procesos de esterilización deben ser verificados. El método de probabilidad residual es el diseño del proceso de esterilización, que en sí mismo necesita ser verificado y confirmado.

 

26: ¿Es el método excesivamente riguroso suficiente para asegurar que no se necesitan pruebas de desafío microbiano?

Respuesta: La connotación del método de sobre-eliminación es que el número de microorganismos en el producto se reduce en 12 logaritmos, y la prueba de desafío microbiano tiene como objetivo demostrar que la probabilidad residual de microorganismos no supera 10⁻⁶; por lo tanto, el método de sobre-eliminación no puede llevar a cabo pruebas de desafío microbiano.

 

27: ¿Está el producto final esterilizado sujeto a una verificación separada del equipo para cada variedad solicitada para registro? ¿Es posible verificar el equipo solo una vez y que las demás variedades puedan utilizarse comúnmente? ¿Pueden los datos de verificación del equipo no adjuntarse a los datos de verificación de la variedad, sino mantenerse únicamente como referencia archivística?

Respuesta: El producto final de esterilización no necesita ser verificado por separado para cada variedad solicitada para registro. Si la variedad registrada adopta condiciones de esterilización iguales o inferiores, solo se podrá llevar a cabo la verificación del equipo bajo las condiciones de esterilización a temperatura más alta; además, los datos de verificación del equipo para las condiciones de esterilización de la variedad deberán adjuntarse a los datos de verificación correspondientes a dicha variedad.

 

28: ¿Puede el proceso de esterilización de formas farmacéuticas no en solución, inyecciones semisólidas o en polvo calcular un valor similar al F0? ¿Es posible calcular el SAL? ¿Cuáles son las disposiciones específicas?

Respuesta: No se puede, pero sí se puede calcular el SAL. Consulte el árbol de decisión para la selección del proceso de esterilización de la UE.

 

29: En cuanto al ensayo de llenado del medio de cultivo, ¿se verifica tanto para la línea de producción como para los productos declarados (cada producto debe llenarse en tres lotes para la verificación)? ¿Puedo preguntar?
(1) ¿Puede la verificación de la línea de producción reemplazar el ensayo de llenado del producto declarado (variedades similares)?
(2) ¿Qué tipo de medio desea, tioglicolato y Martin modificado?
(3) ¿Se requieren tres lotes de pruebas de llenado para diferentes especificaciones de embalaje durante la inspección GMP?
 
Respuesta: (1) La prueba simulada de llenado con medio de cultivo debe realizarse según los diferentes productos, especificaciones de envasado y formas de embalaje. Por ejemplo, si el producto es una inyección en polvo, la prueba simulada de llenado con medio generalmente consistirá en llenar primero con medio líquido y luego añadir el polvo aséptico del producto simulado (como el polvo aséptico PEG). En cambio, para inyecciones asépticas o inyecciones en polvo liofilizadas, solo será necesario llenar con medio líquido. Si las especificaciones de envasado son 2 ml, 5 ml o 10 ml, incluso cuando se trate del mismo producto, deberá realizarse una prueba simulada de llenado específica con su propio medio. Asimismo, si el envasado adopta la forma de frascos tipo vial u otras presentaciones (como jeringas prellenadas o ampollas), deberán llevarse a cabo pruebas simuladas de llenado con medio de cultivo respectivamente, debido al uso de líneas de producción distintas.
 
 
(1) En el trabajo específico, teniendo en cuenta que la prueba de llenado con simulación de medio es en realidad una verificación sistemática de toda la línea de producción, incluyendo equipos de producción, entorno y operación del personal, entre otros, si la prueba se lleva a cabo considerando las condiciones más desfavorables —es decir, cuando el envase es el más grande, la velocidad de llenado es la más lenta, el número de personal es mayor y el tiempo excede el habitual—, entonces no será necesario realizar dicha prueba para cada producto y especificación. Sin embargo, si las condiciones no son las más adversas, deberá realizarse según el producto correspondiente.
 
(2) El medio de amplio espectro generalmente se utiliza para promover el crecimiento de bacterias grampositivas, gramnegativas, levaduras y mohos, como el medio de triptona de soja; en cambio, el medio anaeróbico se emplea únicamente en circunstancias especiales.
 
(3) Solo en el momento de la primera verificación, cada especificación requiere tres pruebas consecutivas exitosas de llenado con simulación de medio, seguidas de dos ocasiones adicionales al año y un lote de pruebas de llenado con simulación de medio en cada ocasión.
 
30: ¿Es factible observar el efecto aséptico del filtro durante el proceso de desinfección e instalación en la prueba de llenado del medio, después de esterilizar el medio, antes del llenado y luego filtrando a través de la membrana del filtro?
A: La prueba de llenado con medio es una evaluación del grado de garantía aséptica de todos los pasos, incluida la filtración aséptica. Se recomienda preparar el medio y utilizarlo directamente en los procesos de filtración aséptica y posterior llenado. En la práctica, se debe prestar atención para evitar que partículas insolubles bloqueen el filtro.
 
31: ¿Cuántos lotes de pruebas de relleno medio se vuelven a validar dos veces al año cada año?
A: Para la revalidación anual de un producto, la práctica habitual es realizar pruebas de llenado intermedio dos veces al año, por cada lote.
 
32: El tiempo de cultivo estéril en la edición de 2005 de la Farmacopea China ha cambiado a 14 días. ¿Es también necesario prolongar el ensayo de cultivo a dos temperaturas después de simular y llenar el medio?
A: El tiempo total de cultivo no debe ser inferior a 14 días. Este puede dividirse en dos temperaturas diferentes (22,5 grados y 32,5 grados) durante al menos 7 días, o bien realizarse directamente a una sola temperatura (22,5 grados).
 
 
33. Por favor, explique qué método estadístico se utiliza y cómo se calcula la tabla.
Respuesta: para la explicación detallada de la fórmula de cálculo, puede consultarse el "Guía de Verificación de Producción de Medicamentos (2003)" organizado por el Departamento de Supervisión de Seguridad de Medicamentos y el Centro de Administración de Certificación de Medicamentos de la Administración Estatal de Alimentos y Medicamentos (Editorial de la Industria Química), libro 258.
Existen dos métodos de cálculo. Uno consiste en utilizar la fórmula aproximada de la distribución de Poisson, es decir, P(X > 0) = 1 - e^(-Np) > 0,95, donde P representa el límite de confianza, N es el número de botellas o lotes simulados y 0,1% (probabilidad de contaminación).
El otro método es una fórmula binomial más precisa, es decir, P(X > 0) = 1 - (1 - X), donde P es el límite de confianza, N es el número de botellas o lotes, y 0,1% (probabilidad de contaminación).
En la página 259 del libro, se presenta una tabla que muestra la relación entre la cantidad simulada de empaquetado, la cantidad de contaminación y la probabilidad de contaminación en un empaquetado simulado con un límite de confianza del 95%.
 
 
34: En la quincuagésima novena película, en la página 72 del folleto, se menciona que las diferencias en los procedimientos de llenado del medio en las similitudes y diferencias en la verificación del proceso de inyecciones en polvo, inyecciones liofilizadas en polvo e inyecciones de pequeño volumen radican principalmente en qué, cómo, dónde y desde dónde hasta el final.
Respuesta: para la inyección aséptica de polvo, la forma de llenado del medio presenta cierta particularidad. Si se desea preparar un polvo aséptico simulado, se debe agregar el medio líquido a la botella mediante una jeringa después del envasado; o bien, dividir previamente el polvo del medio aséptico y añadir agua estéril para inyección con una jeringa tras completar el proceso. Sin embargo, el objetivo principal es evaluar el grado de garantía aséptica durante todo el proceso de envasado aséptico.
 
35: ¿Cómo verificar el sellado de los contenedores?
A: Los métodos físicos y microbiológicos se utilizan a menudo para verificar el sellado de los envases. La detección física presenta múltiples ventajas, como alta sensibilidad, facilidad de uso, detección rápida y bajo costo. Durante el período de validez del producto, los métodos de prueba física pueden emplearse para determinar si la integridad del embalaje cumple con los requisitos establecidos. Una razón importante para realizar pruebas de integridad del embalaje es garantizar que los productos asépticos permanezcan estériles.
Por lo tanto, en la etapa de investigación y desarrollo del embalaje del producto, debemos considerar utilizar un ensayo de invasión microbiana o un método físico de prueba que haya sido probado y sea más eficaz que la detección microbiana para evaluar la integridad del embalaje del producto. Sin embargo, para la prueba de estabilidad del producto durante su período de validez, resulta difícil llevar a cabo el ensayo de invasión microbiana; por ello, se sugiere adoptar el método de detección física. El ensayo de invasión microbiana representa una prueba desafiante para determinar la integridad del sistema final de contenedor/ sellado esterilizado. En la prueba de verificación, se llena con medio el frasco para infusión o el frasco cilíndrico (vial), y luego se esterilizan el tapón y la cubierta en la línea de producción normal. Posteriormente, la superficie de sellado del recipiente se sumerge en una solución bacteriana altamente concentrada en movimiento, permitiendo así que los microorganismos invadan el sistema. Finalmente, se cultiva y verifica la presencia de microorganismos para confirmar la integridad del sistema de sellado del recipiente. Al mismo tiempo, es necesario realizar una prueba de control positivo para asegurar la capacidad de crecimiento del medio de cultivo.
 
36: En la utilización de inmersión microbiana para la verificación del sellado de contenedores, ¿por qué se debe retirar previamente la cubierta de aluminio? Una vez eliminada la cubierta de aluminio, ¿queda únicamente el tapón de goma, lo que podría provocar durante el ensayo una fuga de líquido y afectar así a los resultados de la verificación?
A: la eliminación de la cubierta de aluminio tiene como objetivo crear condiciones más estrictas. En la conferencia, se toma como ejemplo la inyección de polvo liofilizado. Generalmente, existe un alto vacío en el recipiente, lo que evita cualquier tipo de filtración. El evaluador puede determinar si la eliminación de la cubierta de aluminio es aplicable según las características de su producto.
 
37: En la validación de hermeticidad, como en la validación de tambores de aluminio, los resultados no pueden observarse mediante verificación con medio. ¿Existe algún otro método?
A: para recipientes de materias primas asépticas, se recomienda probar métodos físicos, como la infiltración con salmuera.
 
38: ¿Cuál es la cantidad general de muestreo por validación de fugas y cuál es el período de revalidación?
Respuesta: se pueden tomar al menos 10 botellas del comienzo, del medio y del final de la línea de glándulas para llevar a cabo la prueba. La verificación inicial debe evaluar la propiedad de sellado en diferentes momentos durante el período de validez, y luego confirmar que se puede realizar una vez al año.
 
39: Existen requisitos en las pautas de validación para la verificación de hermeticidad de productos de perfusión grandes, pero no hay requisitos para productos en envases secundarios y productos liofilizados. ¿Acaso no es necesaria la verificación de hermeticidad?
A: La inyección de gran volumen, la inyección de pequeño volumen y la inyección en polvo deben someterse a verificación del sellado del envase.
 
40: ¿Son necesarios los ensayos de estanqueidad de envases en todas las formulaciones inyectables, como ampollas y frascos de solución salina?
A: La prueba de sellado del envase debe realizarse en todos los formas farmacéuticas inyectables, como ampollas y frascos de solución salina. Sin embargo, los métodos utilizados son diferentes. En general, se emplea el método físico para las ampollas, mientras que tanto el método físico como el microbiológico se aplican en los frascos de cillín.